关于ABC法正确的是

• A制备酶标生物素
• B亲合素和HRP-B的浓度比不应高于4∶1
• C反应时，游离亲合素作为关键的桥联剂
• D先按比例将酶标生物素与亲合素混合成复合物，然后直接使用
• E需制备生物素化的抗体